Стабільність успадкування гібридної плазміди TrS16 за тривалого культивування трансформанта без підтримуючої селекції

  • В. В. Лукьянчук
  • С. Л. Голембиовская
  • Л. В. Полищук
DOI: https://doi.org/10.7124/FEEO.v25.1176

Анотація

Мета. Вивчити стабільність успадкування в клітинах стрептоміцетного трансформанта TрS16-2 рекомбінантної плазміди TrS16 (8,4 т. п. н.) після його тривалого зберігання без цілеспрямованої селекції (тіострептон). Методи. Застосовували мікробіологічні, генетичні та фізико-хімічні методи. Рекомбінантна плазміда TrS16 сконструйована на базі гібридної плазміди рАХ5а. Безплазмідний варіант штаму Streptomyces globisporus 1912 використовувався як реципієнт плазміди TrS16. Результати. Встановлено, що 5 % клітин популяції трансформанта TрS16-2 зберегли стійкість до тиострептону після його періодичних пересівань без селективного тиску впродовж 5 років. Гібридна плазміда TrS16 виявлена тільки у чверті з досліджених тиострептон резистентних колоній трансформанта TрS16-2. Висновки. Гібридна плазміда TrS16 характеризується задовільною стабільністю успадкування за тривалого зберігання трансформанта TрS16-2 без використання тіострептону для цілеспрямованої селекції.

Ключові слова: плазміда, вектор, вставка, стабільність успадкування.

Посилання

Ganusov V.V., Brilkov A.V., Pechurkin N.S. Population dynamics of bacterial plasmids. Mat. Modeling. 2001. V. 13, No 1. P. 77–98. [in Russian]

Polishchuk L.V., Holembiovska S.L., Matselyukh B.P., Lukyanchuk V.V. Genetic variability of synthesis feature of carote-noids in Streptomyces globisporus 1912. Mikrobiol. Z. 2013. Vol. 75, No 5. P. 40–46. [in Uknainian]

Lukyanchuk V.V., Polishchuk L.V. Cloning of amplicon of chromosomal SCO1206 sequences of Streptomyces coelicolor A 3(2). Mikrobiol. Z. 2010. Vol. 73, No 3. P. 47–51. [in Uknainian]

Okanishi M., Suzuki K., Umezava H. Formation and reversion of Streptomyces protoplasts: condition and morphological study. J. General microbial. 1989. Vol. 80, No 1. P. 398–400.

Kieser T. Factors affecting the isolation of CCC DNA from Streptomyces lividans and Escherichia coli. Plasmid. 1984. Vol. 12, 1. P. 9–36. doi: 10.1099/00221287-80-2-389.

Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Moskow: Mir. 1984. 450 p. [in Russian]

Fass S.H., Engels J.W. Influence of specific signal peptide mutations on the expression and secretion of the alpha-amylase inhibitor tendamistat in Streptomyces lividans. J Biol Chem. 1996. Vol. 271, No 25. P. 15244–15252. doi: 10.1074/jbc.271.25.15244.

Schottel J.L., Bibb M.J., Cohen S.N. Cloning and expression in Streptomyces lividans of antibiotic resistance genes derived from Escherichia coli. J. Bacteriol. 1981. Vol. 146, No 1. P. 360–368.

Kieser T., Hopwood D.A., Wright H.M., Thompson C.J. pIJ101, a multi-copy broad host-range Streptomyces plasmid: func-tional analysis and development of DNA cloning vectors. Mol. Gen. Genet. 1982. Vol. 185, No 2. P. 223–228. doi: 10.1007/bf00330791.