Молекулярно-генетична тест-система для діагностики спадкової гіпогамаглобулінемії

  • М. В. Дибков
  • Ю. С. Степановський
  • Л. І. Чернишова
  • А. П. Волоха
  • А. М. Гільфанова
  • А. В. Бондаренко
  • Ф. І. Лапій
  • К. М. Дибкова
  • Г. Д. Телегєєв
DOI: https://doi.org/10.7124/FEEO.v23.1012

Анотація

Мета. Первинні імунодефіцити – спадкові чи набуті внутрішньоутробно імунодефіцитні стани, які спричинено генетичними порушеннями. Спадкова гіпогамаглобулінемія (СГ) – це один із типів вроджених первинних імунодефіцитів людини, спричинений порушенням диференціації В-лімфоцитів. Брутон тирозинкіназа (BTK) є ключовим регулятором дозрівання В-клітин, тому саме мутації гена BTK призводять до спадкової гіпогамаглобулінемії. Їх виявлення є важливим для молекулярно-генетичного підтвердження діагнозу у хворих на СГ. Методи. Виділення РНК та ДНК, ЗТ-ПЛР та пряме двонаправлене сиквенування за Сенгером. Результати. За допомогою запропонованої тест-системи було проведено аналіз зразків крові хворих на СГ. Показано, що запропонована тест-система дозволяє проводити первинний скринінг мутацій гена BTK. Висновки. Створено і перевірено на клінічних зразках тест-систему для виявлення мутацій у хворих на спадкову гіпогамаглобулінемію, що базується на використанні зворотно-транскриптазної ПЛР та прямого двонаправленого сиквенування. Цю систему запропоновано для проведення первинного скринінгу мутацій гена BTK в Україні.

Ключові слова: спадкова гіпогамаглобулінемія, BTK, мутації, первинні імунодефіцити.

Посилання

# 300755 AGAMMAGLOBULINEMIA, X-LINKED; XLA. OMIM database (ed at the McKusick-Nathans Institute of Genetic Medicine, Johns Hopkins University School of Medicine). URL: http://www.omim.org/entry/300755.

Sideras P., Smith C.I. Molecular and cellular aspects of X-linked agammaglobulinemia. Adv Immunol. 1995. Vol. 59. P. 135–223.

Bruton O.C. Agammaglobulinemia. Pediatrics. 1952. Vol. 9. P. 722–728.

RAPID Project (ed by Uktainian Association of Paediatric Immunology & Dept of Paediatric Infectious Diseases and Paediatric Immunology of Shupyk National Medical Academy of Postgraduate Education) URL: http://vadi.org.ua/rapid (Last accessed: 28.02.2018).

Vetrie D., Vorechovsky I., Sideras P., Holland J., Davies A., Flinter F., Hammarstrom L., Kinnon C., Levinsky R., Bobrow M., Smith C.I.E., Bentley D.R. The gene involved in X-linked agammaglobulinaemia is a member of the src family of protein-tyrosine kinases. Nature. 1993. Vol. 361, No. 6409. P. 226–233.

Vorechovsky I., Zhou J.N., Vetrie D., Bentley D., Bjorkander J., Hammarstrom L., Smith C.I.E. Molecular diagnosis of X-linked agammaglobulinaemia. Lancet. 1993. Vol. 341. P. 1153.

* 300300 BRUTON AGAMMAGLOBULINEMIA TYROSINE KINASE; BTK. OMIM database (ed at the McKusick-Nathans Institute of Genetic Medicine, Johns Hopkins University School of Medicine). URL: http://www.omim.org/entry/300300 (Last accessed: 28.02.2018).

Vihinen M., Vetrie D., Maniar H.S., Ochs H.D., Zhu Q., Vorechovsky I., Webster A.D.B., Notarangelo L.D., Nilsson L., Sowadski J.M., Smith C.I.E. Structural basis for chromosome X-linked agammaglobulinemia: a tyrosine kinase disease. Proc Natl Acad Sci USA. 1994. Vol. 91, No. 26. P. 12803–12807.

Rohrer J., Parolini O., Belmont J.W., Conley M.E. The genomic structure of human BTK, the defective gene in X-linked agammaglobulinemia. Immunogenetics. 1994. Vol. 40, No. 5. P. 319–324.

Hendriks R.W., Bredius R.G., Pike-Overzet K., Staal F.J. Biology and novel treatment options for XLA, the most common monogenetic immunodeficiency in man. Expert Opin Ther Targets. 2011. Vol. 15, No. 8. P. 1003–1021. doi: 10.1517/14728222.2011.585971.

Shared database BTK (Bruton tyrosine kinase) LOVD v.3.0 Build 20c Curators: G.C.P. Schaafsma and M. Vihinen. URL: https://databases.lovd.nl/shared/genes/BTK (Last accessed: 28.02.2018).

Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Analyt. Biochem. 1987. Vol. 162, No. 1. P. 156–159.

Ribaudo R. Preparation of RNA from Tissues and Cells. Current Protocols in Immunology. 2001. UNIT 10.11.1. doi: 10.1002/0471142735.im1011s04.