Вивчення механізмів деградації фруктозо-1,6-бісфосфатази у метилотрофних дріжджів Pichia pastoris

О. В. Дмитрук, Н. В. Булботка, А. А. Сибірний

Анотація


Мета. Дослідити шляхи деградації фруктозо-1,6-бісфосфатази у метилотрофних дріжджів Pichia pastoris. Методи. Використовувалися методи визначення питомої активності фруктозо-1,6-бісфосфатази у дикого і мутантних штамах метилотрофних дріжджів P. pastoris за перенесення клітин із середовища з метанолом на середовище з глюкозою. Дослідження вмісту білка фруктозо-1,6-бісфосфатази проводили за допомогою Вестерн-блот аналізу. Результати. Досліджено зміни в активності фруктозо-1,6-бісфосфатази у контрольного штаму дикого типу GS200, штаму з делецією гена сенсора гексоз GSS1 та штаму з дефектом автофагії SMD1163 P. pastoris за короткотривалої та довготривалої індукції метанолом із додаванням або ж без додавання інгібітора протеосомної деградації MG132. Досліджено деградацію фруктозо-1,6-бісфосфатази методом Вестерн-блот аналізу у штамах GS200, SMD1163 та Δgss1. Висновки. Показано, що тривалість інкубації клітин на метанолі не має особливого впливу на інактивацію ферменту. Ефект протеосомного інгібітора MG132 був незначний. Катаболітна інактивація цитозольних і пероксисомних ферментів пошкоджена в ∆gss1 мутанта, оскільки пошкоджене сигналювання глюкозою. Фруктозо-1,6-бісфосфатаза деградує вакуолярним шляхом, незалежно від тривалості індукції метанолом, що корелює з даними з активності цього ферменту.

Ключові слова: фруктозо-1,6-бісфосфатаза, дріжджі, Pichia pastoris, метанол, автофагія.


Повний текст:

PDF

Посилання

  • Поки немає зовнішніх посилань.