Оптимізація методу ChIP для дослідження регуляції генів-мішеней канонічного ВНТ сигналінгу у новонародженому серці

О. О. Півень

Анотація


Мета. Метою нашої роботи було оптимізувати метод хроматинімунопреципітації (ChIP) з наступною валідацією із застосуванням ПЛР у реальному часі для аналізу функції b-катеніну та плакоглобіну у регуляції експресії генів-мішеней канонічного ВНТ сигналінгу у новонародженому серці. Методи. Дослідження проводили із використанням тканини новонароджених сердець мишей віком 3 доби після народження (P3). Аналізували як тканину серця контрольних мишей, так і мишей із делецією одного алеля гена β-катеніну. Методику ChIP проводили, ґрунтуючись на стандартних протоколах із власними модифікаціями, викладеними у статті. Валідацію результатів ChIP проводили із застосуванням методу ПЛР у реальному часі. Результати. У результаті проведеної роботи нами було адаптовано метод ChIP для вивчення сигнальної функції β-катеніну та плакоглобіну й аналізу специфічних ділянок геному, з якими зв’язуються досліджувані нами білки у новонародженому міокарді. Висновки. Було показано, що за умови гетерозиготного нокауту гена β‑катеніну плакоглобін здатний компенсувати його сигнальну функцію та зв’язуватись із тими ж фрагментами геному, що й β-катенін.

Ключові слова: β-катенін, плакоглобін, Wnt-сигналінг, експресія генів, міокард, хроматинімунопреципітація, ChIP.


Повний текст:

PDF

Посилання

  • Поки немає зовнішніх посилань.